البيانات الفنية
تعليمات استخدام الأعمدة/الألواح لتحلية المياه c18
مقدمة المنتج
تُملأ أعمدة/ألواح تحلية الكربون 18 بمصفوفة هلام سيليكا C18، تتميز مجموعتها الوظيفية، أوكتاديسيل، بكراهية عالية للماء وخصائص احتفاظ ممتازة للمركبات غير القطبية. تستطيع أعمدة/ألواح تحلية الكربون 18 امتصاص جزيئات البادئ/الجزيئات الأولية/الحمض النووي (DNA) مع DMT دون احتباس الملح، مما ينتج عنه منتجات بادئ/جزيئات أولية/حمض نووي عالية النقاء.
دليل الاختيار
تقدم شركة BM Life Sciences أعمدة/ألواح تحلية C18 بأحجام متنوعة، ويمكنك اختيار عمود التحلية المناسب بناءً على تركيز البادئ/الأوليجو. للمعالجة على دفعات، يمكنك اختيار لوح تحلية ذو 96 بئرًا.
| رقم المنتج | القاعدة | مواصفات الأوليجونوكليوتيدات القابلة للتطبيق | خطوات مرجعية |
| SPEC18W150 | 50 ملغ/1 مل | 10 نانومول - 200 نانومول | الخطوة 5 |
| SPEC18W3100 | 100 ملغ/3 مل | 10 نانومول - 600 نانومول | الخطوة 1 |
| SPEC18W3300 | 300mg/3mL | 10 نانومول - 2 أوبمول | الخطوة 2 |
| SPEC18W61000 | 1 جرام/6 مل | 1 ميكرومول - 6 ميكرومول | الخطوة 3 |
| SPEC18W9630 | صفيحة 30 ملجم/96 بئر | 5 نانومول - 100 نانومول | الخطوة 4 |
| SPEC18W9650 | صفيحة 50 ملجم/96 بئر | 10 نانومول - 200 نانومول | الخطوة 4 |
| SPE15C18W9680 | صفيحة 80 ملجم/96 بئرًا (صفيحة 1.5 مل 96 بئرًا) | 10 نانومول - 500 نانومول | الخطوة 5 |
| SPE23C18W9680 | صفيحة 80 ملجم/96 بئرًا (صفيحة 2.3 مل 96 بئرًا) | 10 نانومول - 500 نانومول | الخطوة 5 |
ملحوظة
يمكن لعمود/لوحة التنظيف C18 أيضًا إزالة الأملاح من المنتج الخام والبرايمر/الأوليجو بعد تنقية HPLC وPAGE، راجع الخطوة 5 للحصول على التفاصيل.
الكاشف
درجة كروماتوغرافيا الأسيتونتريل
0.1 م شاي، درجة الحموضة 7.0
0.5 مول كلوريد الصوديوم
محلول التنظيف (5% أسيتونتريل مذاب في 0.5 مول كلوريد الصوديوم)
3% حمض ثلاثي فلورو الأسيتيك (TFA)
الماء منزوع الأيونات
20% أسيتونتريل
محلول TE: 10 ملي مول/لتر Tris-cla، 1 ملي مول/لتر EDTA، درجة الحموضة 8.0
الخطوة 1
إعداد العينة
أضف 0.5 مولار NacI إلى عينة الأوليجونوكليوتيد إلى حجم 2 مل.
تفعيل عمود التحلية
التنشيط: تم استخدام 1 مل من الأسيتونتريل لتنشيط العمود.
تحقيق التوازن: موازنة العمود مع 1 مل من محلول TEAA بتركيز 0.1 مولار (PH7.0).
عملية التنظيف
1. مرر 2 مل من المحلول المحتوي على الأوليجونوكليوتيدات عبر عمود تحلية المياه.
2. اشطف العمود مرتين بـ 1 مل من محلول التنظيف لإزالة التسلسلات غير الناجحة.
3. اشطف العمود مرتين بـ 1 مل من الماء منزوع الأيونات لإزالة الأملاح.
4. اشطف العمود مرتين بـ 1 مل من حمض ثلاثي فلورو أسيتيك 3% لإزالة DMT ولاحظ أن الطبقة الممتصة تتحول إلى اللون البرتقالي والأحمر؛ و
5. اشطف عمود إزالة الأملاح مرتين بـ 1 مل من الماء منزوع الأيونات لإزالة حمض ثلاثي فلورو الأسيتيك والأملاح المتبقية.
6. استخلص 1 مل من 20٪ أسيتونتريل وقم بتجميعه.
الخطوة 2
إعداد العينة
أضف 0.5 مولار NacI إلى عينة الأوليجونوكليوتيد إلى حجم 4 مل.
تفعيل عمود التحلية
التنشيط: تم استخدام 2 مل من الأسيتونتريل لتنشيط العمود.
تحقيق التوازن: قم بموازنة عمود سعة 2 مل مع 0.1 م TEAA (درجة الحموضة 7.0).
عملية التنظيف
1. مرر 4 مل من المحلول المحتوي على الأوليغونوكليوتيدات عبر عمود تحلية المياه.
2. اشطف العمود مرتين بـ 2 مل من محلول التنظيف لإزالة التسلسلات غير الناجحة.
3. اشطف العمود مرتين بـ 2 مل من الماء منزوع الأيونات لإزالة الأملاح ؛)
4. اشطف العمود مرتين بـ 2 مل من حمض ثلاثي فلورو أسيتيك 3% لإزالة DMT، تحولت طبقة الامتصاص إلى اللون البرتقالي والأحمر.
5. اشطف العمود بالماء منزوع المعادن مرتين مع 2 مل من الماء منزوع الأيونات لإزالة حمض ثلاثي فلورو الأسيتيك والأملاح المتبقية.
6. استخلص 2 مل من 20٪ أسيتونتريل وقم بتجميعها.
الخطوة 3
إعداد العينة
أضف 0.5 مولار Nac إلى عينة الأوليجونوكليوتيد إلى حجم 10 مل.
تفعيل عمود التحلية
التنشيط: تم استخدام 5 مل من الأسيتونتريل لتنشيط العمود.
التوازن: تم موازنة العمود باستخدام 10 مل من 0.1 م TEAA (PH 7.0).
عملية التنظيف
1. تم تمرير 10 مل من المحلول المحتوي على الأوليجونوكليوتيدات من خلال عمود تحلية المياه.
2. تم غسل العمود مرتين بـ 5 مل من محلول التنظيف لإزالة التسلسلات غير الناجحة.
3. اشطف العمود مرتين بـ 5 مل من الماء منزوع الأيونات لإزالة الأملاح.
4. اغسل العمود مرتين بـ 5 مل من حمض ثلاثي فلورو أسيتيك 3% لإزالة DMT ولاحظ أن طبقة الامتصاص تحولت إلى اللون البرتقالي والأحمر.
5. اشطف العمود مرتين بـ 5 مل من الماء منزوع الأيونات لإزالة حمض ثلاثي فلورو الأسيتيك وبقايا الملح.
6. استنشق 5 مل من 20% أسيتونتريل واجمع.
الخطوة 4
إعداد العينة
أضف 0.5 مولار كلوريد الصوديوم إلى عينة الأوليجونوكليوتيد إلى حجم 0.5 مل.
تنشيط لوحة 96 بئرًا
التنشيط: تم تمرير 0.5 مل من الأسيتونتريل عبر كل بئر من لوحة مكونة من 96 بئر.
التوازن: تحقيق التوازن في لوحة مكونة من 96 بئرًا باستخدام 0.5 مل من محلول TEAA بتركيز 0.1 مولار (درجة الحموضة 7.0).
إجراءات التنظيف
1. مرر 0.5 مل من المحلول المحتوي على الأوليجونوكليوتيد من خلال لوحة مكونة من 96 بئرًا.
2. اشطف اللوحة المكونة من 96 بئرًا مرتين باستخدام 0.5 مل من محلول الغسيل لإزالة التسلسلات السيئة.
3. اشطف اللوحة المكونة من 96 بئرًا مرتين بـ 0.5 مل من الماء منزوع الأيونات لإزالة الأملاح.
4. اغسل اللوحة ذات 96 بئرًا مرتين بـ 0.5 مل من حمض ثلاثي فلورو أسيتيك 3% لإزالة DMT، ولاحظ أن طبقة الامتصاص تتحول إلى اللون البرتقالي والأحمر؛ و
5. اشطف اللوحة المكونة من 96 بئرًا مرتين باستخدام 0.5 مل من الماء منزوع الأيونات لإزالة حمض ثلاثي فلورو الأسيتيك وبقايا الملح.
6. قم بإخراج 0.5 مل من 20٪ أسيتونتريل وجمع المادة.
الخطوة 5
إعداد العينة
أضف 0.5 مولار كلوريد الصوديوم إلى عينة الأوليجونوكليوتيد إلى حجم 1.2/2 مل.
تنشيط لوحة 96 بئرًا
التنشيط: قم بتخطي 1-4 مل 0.5 مل من الأسيتونتريل من خلال كل بئر من لوحة مكونة من 96 بئر.
تحقيق التوازن: قم بموازنة لوحة ذات 96 بئرًا مع 1-4 مل من 0.5 مل من محلول TEAA بتركيز 0.1 مولار (درجة الحموضة 7.0).
عملية التنظيف
1. مرر 0.5-2 مل من المحلول المحتوي على الأوليجونوكليوتيد من خلال لوحة مكونة من 96 بئرًا.
2. اشطف اللوحة ذات الـ 96 بئرًا مرتين بنصف مل من محلول الغسيل لإزالة التسلسلات المؤسفة ؛)
3. اشطف اللوحة المكونة من 96 بئرًا مرتين بنصف مل من الماء منزوع الأيونات لإزالة الأملاح.
4. اغسل اللوحة ذات الـ 96 بئرًا مرتين بـ 1/2 مل من حمض ثلاثي فلورو أسيتيك 3٪ لإزالة DMT، ولاحظ أن طبقة الامتصاص تتحول إلى اللون البرتقالي والأحمر؛
5. اشطف اللوحة المكونة من 96 بئرًا بنصف مل من الماء منزوع الأيونات مرتين لإزالة حمض ثلاثي فلورو الأسيتيك وبقايا الملح.
6. قم بتصفية 1/2 مل من 20٪ أسيتونتريل وجمع المادة.
الخطوة 6
الكاشف
درجة كروماتوغرافيا الأسيتونتريل
0.05 م شاي، درجة الحموضة 7.0
2 م شاي، درجة الحموضة 7.0
ماء منزوع الأيونات (لتحلية وتنقية جزيئات الحمض النووي الريبي بدون RNase) 60% أسيتونتريل (مذاب في ماء يحتوي على 0.5% NH4OH)
20% أسيتونتريل (لتحلية جزيئات الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي بعد إزالة الحماية)
محلول TE: 10 ملي مول/لتر Tris-cla، 1 ملي مول/لتر EDTA، درجة الحموضة 8.0
إعداد العينة
الأوليغو المنقى بتقنية HPLC: أضف كمية مناسبة من TEAA بتركيز 0.1 مولار إلى الأوليغو المنقى بتقنية HPLC بحيث يكون تركيز الأسيتونتريل النهائي ≤ 5%. الأوليغو المنقى: أذب شظايا الهلام المحتوية على الأوليغونوكليوتيد في TEAA بتركيز 0.05 مولار، ثم أزل شظايا الهلام، ثم أذب الأوليغو في 2 مل على الأقل من TEAA بتركيز 0.1 مولار.
الأوليغوس المذابة في NH4OH أو AMA: تتبخر حتى تجف ثم تذوب في 2 مل من 0.1 م TEAA.
تفعيل مضخة تحلية المياه
التنشيط: تم استخدام 1 مل من الأسيتونتريل لتنشيط العمود.
تحقيق التوازن: موازنة عمود TEAA بحجم 1 مل 2 م (درجة الحموضة 7.0).
عملية تحلية أوليجوس لتنقية HPLC
1. مرر المحلول المحتوي على الأوليجونوكليوتيدات عبر عمود تحلية المياه.
2. اشطف عمود تحلية المياه مرتين بـ 1 مل من الماء منزوع الأيونات لإزالة الأملاح.
3. قم بالتصفية من خلال عمود يحتوي على 1 مل من 60٪ أسيتونتريل ثم قم بالتجميع.
عملية إزالة الأملاح من الأوليغوس باستخدام طريقة PAAG
1. مرر المحلول المحتوي على الأوليجونوكليوتيدات عبر عمود تحلية المياه.
2. اشطف عمود تحلية المياه مرتين بـ 1 مل من الماء منزوع الأيونات لإزالة الأملاح.
3. قم بالتصفية من خلال عمود يحتوي على 1 مل من 60٪ أسيتونتريل ثم قم بالتجميع.
إجراءات إزالة الأملاح من جزيئات الحمض النووي بعد التخليق
1. مرر المحلول المحتوي على الأوليجونوكليوتيدات عبر عمود تحلية المياه؛ و
2. اشطف عمود TEAA 0.1M 1 مل مرتين لإزالة التسلسلات غير الناجحة.
3. اشطف عمود تحلية المياه مرتين بـ 1 مل من الماء منزوع الأيونات لإزالة الأملاح.
4. مرر العمود من خلال 1 مل من أسيتونتريل 20٪ وقم بالتجميع.
عملية إزالة الأملاح من RNA oligos بعد التخليق
1. مرر المحلول المحتوي على الأوليجونوكليوتيدات عبر عمود تحلية المياه.
2. اشطف العمود بـ 2 مل 0. 1 م TEAA.
3. اشطف العمود بـ 2 مل من الماء الخالي من RNase.
4. مرر 2 مل من 20٪ أسيتونتريل (ماء خالٍ من RNase) عبر عمود، ثم قم بتصفية المحلول وجمعه. تخزين الأوليجونوكليوتيدات
تمنع الأوليجونوكليوتيدات المذابة في 20% أسيتونتريل والمخزنة عند 4 درجات مئوية نمو الكائنات الحية الدقيقة وهي مناسبة للتخزين على المدى القصير.
يمكن تخزين الأوليجونوكليوتيدات في محلول أسيتونتريل بنسبة 20% (أو مذابة في محلول قلوي مثل TE) لفترة طويلة في درجات حرارة منخفضة تصل إلى -20 درجة مئوية.
يمكن تخزين الأوليجونوكليوتيدات على شكل مسحوق مجفف بالتجميد لفترة طويلة.
تحذير
كميات الكواشف المستخدمة هي مجرد توصيات ويجب تحسينها في كل حالة على حدة.
كميات الكواشف المستخدمة هي مجرد توصيات ويجب تحسينها على أساس كل حالة على حدة.
يجب أن يخضع عمود تحلية المياه لتوازن تنشيط كافٍ لإزالة البقايا من العمود/اللوح وتحسين قدرته على الارتباط. يجب أخذ عينات الأوليغونوكليوتيدات المُصنّعة ببطء لمنع دخول مسحوق CPG إلى العمود/اللوح للتنظيف والتلوث المتبادل.
تستخدم أعمدة/رقائق تحلية المياه C18 مصفوفة السيليكا، ونطاق الرقم الهيدروجيني المطبق هو 2-7، حيث أن الرقم الهيدروجيني > 7.5 يذيب مصفوفة السيليكا بسهولة، بينما الرقم الهيدروجيني
عند استخدام TFA لإزالة الأملاح من DMT، انتبه إلى الوقت، لأن الاستخدام لفترة طويلة جدًا قد يؤدي إلى إزالة البيورين.
كن مرتبطا
أعمدة تركيب فريتس CPG العالمية من B&M، تقنية إزالة الأملاح والتنقية السريعة
أعمدة تركيب فريتس CPG العالمية من B&M، تقنية تحلية المياه وتنقيتها السريعة:
يتم تصنيع B&M Universal CPG Frits من البولي إيثيلين عالي الوزن الجزيئي المستورد ومسحوق CPG المستورد، ويتم معالجته بتقنية خاصة، وله تأثير تركيبي جيد في عمود التركيب، ومعدل طفرة منخفض، وجودة منتج موثوقة.
بعد اكتمال عملية التخليق في جهاز التوليف من سلسلة Dr.Oligo/Mermade وإذابة الأمونيا، يمكن إخراج Oligo مباشرة إلى عمود التخليق، وبعد الجرعة والصرف، يمكن استخدامه لتفاعل PCR الروتيني مباشرة دون خطوات تنقية إضافية، وهو مناسب للتشغيل، ويوفر التكلفة والتسليم بشكل أسرع!
الخطوات المحددة للعملية هي كما يلي:
1، تركيب B&M Universal CPG Frits أعمدة/ألواح/ثانية اصطناعية 400 ميكرولتر، 75% من خليط الماء فائق النقاء أسيتونتريل يتم غسله مرتين لإزالة الكواشف الاصطناعية المتبقية؛
2، أعمدة/ألواح تحليل الأمونيا الاصطناعية من B&M Universal CPG Frits، 90 درجة مئوية، 80 رطل/بوصة مربعة، تحليل الأمونيا لمدة 2-2.5 ساعة؛
3، 100٪ أسيتونتريل 400L غسل العمود / اللوحة الاصطناعية، مرتين؛
4، مزيج من الماء فائق النقاء 90% أسيتونتريل 400 ميكرولتر، عمود/لوحة غسيل اصطناعية، مرتين، ضخ جاف؛
5. حجم مناسب من المذيب لتصفية البادئات على العمود/اللوحة الاصطناعية، يمكن أن يكون المذيب عبارة عن ماء نقي للغاية، يمكن أن يكون خليط ماء نقي للغاية من ثلاثي إيثيل أمين بنسبة 3٪، ويمكن أيضًا أن يكون خليط ماء نقي للغاية من حوالي 20٪ أسيتونتريل.
6. يمكن قياس محلول الإيلوشن وتوزيعه وتصريفه وتعبئته وشحنه.